人滑膜細胞提取物

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

人滑膜細胞提取物是從人滑膜細胞提取的，人原代滑膜細胞從正常人滑膜組織制備。正常人滑膜組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人滑膜組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，進口來源，保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

0.094ng/ml人抗胃壁細胞抗體(AGPA/PCA)ELISA試盒 pUNO1-hCGAS-AA

0.094ng/ml人抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體(GM1)ELISA試盒pUNO1-hCLEC4Aa

9.375pg/ml人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)ELISA試盒pUNO1-hCRLF2a

0.094ng/ml人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA試盒 pUNO1-hG3BP1

Qualitative人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)ELISA試盒pUNO1-hGNLY

Qualitative人抗EB病抗體(EBV)ELISA試盒 pUNO1-hHIGD1A

Qualitative人抗流行性出熱病抗體IgM (EHF)ELISA試盒 pUNO1-hICOS

Qualitative人抗流行性出熱病抗體IgG (EHF)ELISA試盒pUNO1-hIL40

Qualitative人管內(nèi)皮抑素抗體(ES-Ab)ELISA試盒 pUNO1-hKSR1a

Qualitative人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA試盒pUNO1-hLGALS3
人滑膜細胞提取物脂肪合酶(FASN)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)(R型)人參皂苷Rg3(標(biāo)準品)

脂肪合酶(FASN)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)(S型)人參皂苷Rg3(標(biāo)準品)

乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人參皂苷Rh1(標(biāo)準品)

野鼠色基因相關(guān)蛋白(AGRP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)(S型)人參皂苷Rh2(標(biāo)準品)

激肽釋放酶1(KLK1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人參皂苷Rh3(標(biāo)準品)

胰腺再生蛋白Iα(REG1α)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人參皂苷Ro（標(biāo)準品）

胰腺特轉(zhuǎn)錄因子1α(PTF1α)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)豆蔻木脂素(標(biāo)準品)

含管性友病因子A域蛋白3A(vWA3A)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)桂醇（標(biāo)準品）

補體因子P(CFP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)桂醛(標(biāo)準品)

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)桂(標(biāo)準品)

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)瑞香素/祖師麻素(標(biāo)準品)

核心蛋白聚糖(DCN)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)三氯蔗糖(標(biāo)準品)

脂轉(zhuǎn)運蛋白(PLTP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)三七皂甙R1（標(biāo)準品）

激肽釋放酶2(KLK2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)三葉豆紫檀苷(標(biāo)準品)

抗神經(jīng)節(jié)苷脂M1抗體(Anti-GM1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)桑皮苷A（標(biāo)準品）